WO2002046758A1 - Procede de magnetisation de marqueurs chimiques ou biologiques - Google Patents

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Christine Betremieux
Laetitia Gaillard
Gérard OVLAQUE
Christophe Vinzia
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    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
    • G01N33/54313—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals the carrier being characterised by its particulate form
    • G01N33/54326—Magnetic particles

Definitions

  • the invention relates to a method of magnetizing chemical or biological markers as well as to the use of said biological markers in a biological analysis test.
  • Immunological analysis tests then typically relate to the search, in blood or in a blood component, for antigens present on the surface of red blood cells using magnetized anti-erythrocyte antibodies (for example erythrocyte typing) or the anti-erythrocyte antibody research using magnetized red cells on which specific antigens are present and / or attached.
  • magnetized anti-erythrocyte antibodies for example erythrocyte typing
  • anti-erythrocyte antibody research using magnetized red cells on which specific antigens are present and / or attached.
  • This type of process uses magnetic particles, the surface of which has been functionalized so as to form bonds with a specific marker.
  • the invention therefore aims to remedy all of these drawbacks by proposing in particular a method of direct magnetization of particulate and / or figured elements without the intermediary of molecules recognizing for example structures of antigen and / or antibody type and this without masking and / or modifying the structures to be implemented, for example during a biological analysis test.
  • the invention provides a method of magnetizing chemical or biological markers using magnetic particles, said method comprising the steps consisting in: - activating the magnetic particles so as to modify their state of surface ; - bringing the activated magnetic particles into contact with the markers so as to create non-specific bonds between them.
  • the invention proposes the use of magnetized biological markers by the implementation of such a method as reagents or analytes in a biological analysis test.
  • the method makes it possible to magnetize markers using magnetic particles by creating non-specific bonds between them.
  • the markers can be chemical, for example in molecular form, or biological, for example in cellular form, and the magnetic particles are for example beads of compatible polymers which are loaded with a magnetic material.
  • a marker is in contact with its immediate environment via its surface and, in the case of a cellular element, through its membrane.
  • the cell has, in a way, an arsenal of possible links with various surrounding molecular structures, such as magnetic particles.
  • the cell is able to establish links with elements as well so:
  • a receptor structure of the membrane is recognized by an effector which is specific to it (for example in the case of hormone-receptor bonds or antigen-antibody bonds);
  • This cell membrane the first meeting structure of the cell, will therefore be the site of important interactions both for the cell and for the external environment. It carries on its surface the majority of molecular structures for identifying the cell, but also structures capable of specifically or not binding to foreign molecules.
  • the markers are red blood cells whose cell membrane is the support for the antigenic structures defining the various blood groups which are sought before any blood transfusion.
  • the process according to the invention uses the large areas of phospholipids and / or proteins present on the surface of a red cell, said zones not directly involved in the definition of blood groups and phenotypes.
  • the red cells thus magnetized have the double property of being attracted under the effect of a magnetic field and of carrying on their surface the antigenic structures mentioned above. -above.
  • the magnetized red blood cell will therefore be able to retain its expression properties of an antigenic structure while being mobile.
  • markers and in particular red blood cells, are treated in such a way that their magnetic susceptibility is greatly increased, thus allowing them to migrate in a magnetic field created by a permanent magnet or an electromagnet.
  • magnetic marking is not done by means of a magnetized probe molecule but by the use of particles interacting in a non-specific way with the red blood cell membrane so as to create a multitude of weak intensity bonds between the red blood cell surface and magnetic particles.
  • magnetic particles are used which have the characteristics of having a very high homogeneity in size, in particular less than a micron and for example around 200 nm, a high load of ferromagnetic material for example around 75% by mass and a rather hydrophobic surface finish.
  • the size of the markers is greater than that of the particles used to allow transfer into the magnetic field.
  • These particles are attached to the surface of the red blood cell, for example by the intermediary of bovine serum albumin so as to create multiple non-specific bonds and low intensities between the surface of the red blood cell and the particles.
  • the fixation takes place in two stages, the first consists in the activation of the particles so as to modify their surface state and the second is the bringing into contact of these activated particles with a suspension of red blood cells treated or not by proteolytic enzymes, so as to create non-specific bonds between particles and red cells.
  • Activation can be carried out either immediately before contacting the marker or during manufacture.
  • the red cells thus obtained are attracted by a magnetic field and can thus be used directly or, in a variant, treated with solutions of enzymes generally encountered in immuno-hematological tests.
  • An embodiment of the method for magnetizing red cells without damaging the antigens which they carry is described below, in which the activation of the particles is carried out using a sticky substance comprising a solution of bovine albumin.
  • Particles of type P201 from the company Ademtech are placed in the presence of a solution of bovine albumin at 0.1% (weight / volume) in PBS buffer pH 7.2. After an incubation of thirty minutes at room temperature and with shaking (proscribe any magnetic shaking), the particles in suspension are attracted by a magnet and the supernatant devoid of particles is eliminated.
  • the “glued” particle pellet can be used directly during the red blood cell awareness phase.
  • the activation of the particles can be carried out, optionally in addition to the action of a sticky substance, using a wetting agent or detergent such as cholic acid or Tween 20® so to modify the surface state of said particles.
  • this activation can be carried out using electromagnetic radiation, such as gamma or UV radiation, which are known to modify plastic-type surfaces.
  • Second step raising red blood cells
  • the globular suspension buffered LISS Low lonic Strenght Solution
  • the suspension After having perfectly homogenized the suspension (check that there are no more particle aggregates), it is incubated for 30 minutes at room temperature with stirring soft but homogeneous (the entire reaction volume must be set in motion).
  • the red cells are then washed with a PBS buffer pH 7.4 (two washings by centrifugation, three minutes at 500 g).
  • the pellet of sensitized red cells can then be taken up at the concentration for carrying out the analysis using a LISS buffer.
  • the ratio between the quantity of particles used and the quantity of red blood cells is between 600 and 1000 so as to obtain sufficient magnetization without risking degrading the antigens present on the surface of the red blood cell.
  • the surface occupied by the particles typically represents around 10% of the total surface of the red blood cell membrane.
  • red cells sensitized by paramagnetic particles then have the double property of being attracted by a magnetic field and also of possessing on their surface blood antigens (group and phenotype). They can then be used as a reaction support and vector for transporting the antigen-antibody couple in an immunological analysis test.
  • the red cells thus obtained can be used in tests of RAI type (Search for Irregular Agglutinins) either directly as a reagent or as an analyte, or undergo treatment with proteolytic enzymes such as papain to perform a so-called enzymatic analysis.
  • RAI type Search for Irregular Agglutinins
  • red cells having ferromagnetic particles on their surface giving them a paramagnetic property can be driven under the action of a magnetic force towards the reactive zone of a display device so as to allow the detection of directed antibodies. against antigenic determinants present on the surface of red blood cells. It is also possible to treat directly using the method described the red blood cells as an analyte of a blood sample to make them paramagnetic, and thus allow the migration of said red blood cells to an area capable of detecting the antigens that 'they support.
  • particulate elements for example antibodies
  • magnetized antibodies they can be used for training said red cells for example for their grouping.
  • chemical markers can be treated so as to be made paramagnetic by means of a method analogous to that presented above.
  • Such magnetized markers then have the dual property of being attracted under the effect of a magnetic field and of retaining a functional surface to allow the coupling of all kinds of chemical or biological molecules.
  • the method of the invention allows direct magnetization of markers, and in particular of figured elements, without the use of covalently coupled molecules.
  • the interaction between the particles and the markers is not final. There is therefore a possibility of finding the markers in their initial state after desorption of the particles. This desorption step can be carried out under mild conditions which do not alter the surface of the marker.
  • the method also has the advantage of the speed and simplicity of setting up the interaction between the markers and the particles, simply under the influence of the probabilities of encountering the elements which have to interact.
  • the particles used are non-organic products whose shelf life is very long and incommensurate with that of particles functionalized with organic products which are known to be highly unstable over time.

Abstract

L'invention concerne un procédé de magnétisation de marqueurs chimiques ou biologiques à l'aide de particules magnétiques, ledit procédé comprenant les étapes consistant à: - activer les particules magnétiques de sorte à modifier leur état de surface; - mettre en contact les particules magnétiques activées avec les marquers de sorte à creer des liaisons non spécifiques entre eux. L'invention concerne également l'utilisation de marqueurs biologiques magnétisés par la mise en oeuvre d'un tel procédé comme réactifs ou analytes dans un test d'analyse biologique.

Description

Procédé de magnétisation de marqueurs chimiques ou biologiques
L'invention est relative à un procédé de magnétisation de marqueurs chimiques ou biologiques ainsi qu'à l'utilisation desdits marqueurs biologiques dans un test d'analyse biologique.
Elle concerne particulièrement la magnétisation de cellule, notamment d'hématies portant sur leur surface des antigènes de groupe sanguin, ou la magnétisation d'anticorps.
Les tests d'analyse immunologique concernent alors typiquement la recherche, dans du sang ou dans un composant sanguin, d'antigènes présents à la surface des globules rouges à l'aide d'anticorps anti-érythrocytaires magnétisés (par exemple typage érythrocytaire) ou la recherche d'anticorps anti-érythrocytaires à l'aide d'hématies magnétisées sur lesquelles sont présents et/ou fixés des antigènes spécifiques.
On connaît déjà des procédés de magnétisation de marqueurs à l'aide de particules magnétiques dans lesquels les particules sont liées aux marqueurs par des liaisons spécifiques ou covalentes.
Ce type de procédé utilise des particules magnétiques dont la surface a été fonctionnalisée de sorte à former des liaisons avec un marqueur spécifique.
II présente donc l'inconvénient de nécessiter la préparation de particules magnétiques spécifiques en fonction du marqueur à magnétiser.
En outre, ce couplage spécifique ou covalent est quelque fois difficile à réaliser et est conditionné par l'utilisation d'un nombre limité de combinaisons (couple antigène-anticorps, couple avidine-biotine ...). Cette technique nécessite donc soit de posséder un certain type d'anticorps ou d'antigène, soit de marquer spécifiquement les molécules effectrices par la biotine. Par ailleurs, la conservation (durée de conservation, température de stockage...) de ces particules fonctionnalisées est en grande partie liée à la fragilité de la molécule fixée à la surface de la particule.
L'invention vise donc à remédier à l'ensemble de ces inconvénients en proposant notamment un procédé de magnétisation direct d'éléments particulaires et/ou figurés sans l'intermédiaire de molécules reconnaissant par exemple des structures de type antigène et/ou anticorps et ceci sans masquer et/ou modifier les structures devant être mises en œuvre par exemple au cours d'un test d'analyse biologique.
A cet effet, et selon un premier aspect, l'invention propose un procédé de magnétisation de marqueurs chimiques ou biologiques à l'aide de particules magnétiques, ledit procédé comprenant les étapes consistant à : - activer les particules magnétiques de sorte à modifier leur état de surface ; - mettre en contact les particules magnétiques activées avec les marqueurs de sorte à créer des liaisons non spécifiques entre eux.
Selon un deuxième aspect, l'invention propose une utilisation de marqueurs biologiques magnétisés par la mise en oeuvre d'un tel procédé comme réactifs ou analytes dans un test d'analyse biologique.
D'autres objets et avantages de l'invention apparaîtront au cours de la description qui suit.
Le procédé permet de magnétiser des marqueurs à l'aide de particules magnétiques par création de liaisons non spécifiques entre eux.
Les marqueurs peuvent être chimiques, par exemple sous forme moléculaire, ou biologique, par exemple sous forme cellulaire, et les particules magnétiques sont par exemple des billes de polymères compatibles qui sont chargées avec un matériau magnétique. Un marqueur est en contact avec son environnement immédiat par l'intermédiaire de sa surface et, dans le cas d'un élément cellulaire, par l'intermédiaire de sa membrane.
Celle-ci peut être décrite comme une bicouche de phospholipides dans laquelle surnage une mosaïque fluide de protéines plus ou moins glycosilées. La diversité moléculaire de la membrane ainsi que sa grande fluidité suivant les conditions environnementales, lui autorisent l'établissement d'une multitude de relations avec le milieu extérieur. La cellule possède en quelque sorte un arsenal de liaisons possibles avec diverses structures moléculaires environnantes, telles que les particules magnétiques.
Ainsi, la cellule est capable d'établir des liens avec des éléments aussi bien de manière :
- spécifique, par exemple lorsqu'une structure réceptrice de la membrane est reconnue par un effecteur qui lui est spécifique (par exemple dans le cas de liaisons hormone-récepteur ou de liaisons antigène-anticorps) ;
- non spécifique, par adsorption passive desdites molécules à sa surface ; par exemple dans le cas des antigènes du système Lewis, adsorbés à la surface du globule rouge humain.
Cette membrane cellulaire, première structure de rencontre de la cellule, va donc être le siège d'interactions importantes tant pour la cellule que pour le milieu extérieur. Elle porte à sa surface la majorité des structures moléculaires d'identification de la cellule, mais également des structures capables de se lier spécifiquement ou non à des molécules étrangères.
Dans un exemple particulier, les marqueurs sont des hématies dont la membrane cellulaire est le support des structures antigéniques définissant les divers groupes sanguins qui sont recherchés avant toute transfusion sanguine. Actuellement de très nombreux systèmes de diagnostic pour la recherche soit des anticorps présents dans un milieu biologique soit de structures antigéniques provoquant une réponse de l'hôte sont basés sur l'utilisation de particules magnétiques fonctionnalisées.
Par exemple, pour le tri d'une population de cellules présentant l'antigène CD4 dans un échantillon de sang humain, il est possible de fixer spécifiquement une particule ferromagnétique à la surface de cellules CD4 positives par l'intermédiaire d'un anticorps approprié. Il suffit alors de soumettre l'ensemble de l'échantillon de sang à un champ magnétique, afin d'isoler de la population les cellules ayant interagit avec les particules.
Ces techniques sont basées exclusivement sur l'utilisation de particules magnétiques de natures diverses mais présentant une caractéristique fondamentale qui est la « fonctionnalisation » de leur surface de contact par une molécule de reconnaissance.
Autrement dit par fixation de manière covalente des molécules présentant des propriétés de reconnaissance spécifique du marqueur.
Par exemple, on peut fixer à la surface de ces particules des protéines de type anticorps qui vont pouvoir reconnaître spécifiquement les antigènes qui leurs correspondent, permettant ainsi la fixation indirecte par leur intermédiaire de la particule magnétique à la structure antigénique (quelle soit particulaire ou soluble).
De même, la fixation de molécule de type avidine ou streptavidine permet de créer un pont spécifique entre les particules et tout élément qu'il soit figuré ou soluble présentant à sa surface des molécules de biotine.
A contrario, le procédé suivant l'invention utilise les larges zones de phospholipides et/ou de protéines présentes à la surface d'une hématie, lesdites zones n'intervenant pas directement dans la définition des groupes et phénotypes sanguins.
En effet, ces zones se révèlent d'un grand intérêt si on les fonctionnalise au travers de liaisons avec des éléments extérieurs, conférant ainsi à l'hématie des propriétés dynamiques, par exemple des propriétés de déplacement dans un environnement particulier.
Dans le cas où des particules paramagnétiques sont liées de façon non spécifique sur ces zones, les globules rouges ainsi magnétisés présentent la double propriété d'être attirés sous l'effet d'un champ magnétique et de porter sur leur surface les structures antigéniques mentionnées ci-dessus.
On utilise ainsi la propriété des membranes cellulaires à pouvoir établir une multitude d'interactions dites non spécifiques avec des particules de sorte à utiliser la propriété cinématique des particules et ainsi transmettre aux hématies cette faculté de mobilité.
L'hématie magnétisée va donc pourvoir conserver ses propriétés d'expression d'une structure antigénique tout en étant mobile.
Dans le cadre du procédé, on traite des marqueurs, et notamment des hématies, de telle manière que leur susceptibilité magnétique soit fortement augmentée, leur permettant ainsi de migrer dans un champ magnétique créé par un aimant permanent ou un électro-aimant.
Ce « marquage magnétique » ne se fait pas par l'intermédiaire d'une molécule sonde magnétisée mais par l'utilisation de particules interagissant de façon non spécifique avec la membrane de l'hématie de sorte à créer une multitude de liaisons de faible intensité entre la surface de l'hématie et les particules magnétiques. A cet effet, on utilise des particules magnétiques qui présentent comme caractéristiques d'avoir une très grande homogénéité de taille, notamment inférieure au micron et par exemple d'environ 200 nm, une forte charge en matériau ferromagnétique par exemple environ 75% en masse et un état de surface plutôt hydrophobe.
Dans un exemple particulier, la taille des marqueurs est supérieure à celle des particules utilisées pour permettre le transfert dans le champ magnétique.
Ces particules sont fixées à la surface de l'hématie par exemple par l'intermédiaire de sérum albumine bovine de sorte à créer de multiples liaisons non spécifiques et de faibles intensités entre la surface de l'hématie et les particules.
La nature des interactions dites faibles entre les particules et les marqueurs dont on doit augmenter la susceptibilité magnétique est largement tributaire de l'état de surface des particules. Cet état de surface peut être de type hydrophobe et/ou hydrophile. Il est le résultat de techniques de production adaptées favorisant l'un ou l'autre état de surface.
A cet effet, la fixation se déroule en deux étapes, la première consiste en l'activation des particules de sorte à modifier leur état de surface et la deuxième est la mise en présence de ces particules activées avec une suspension d'hématies traitées ou non par des enzymes protéolytiques, de sorte à créer des liaisons non spécifiques entre les particules et les hématies.
L'activation peut être réalisée soit extemporanément avant la mise en contact avec le marqueur soit de fabrication.
Les hématies ainsi obtenues sont attirées par un champ magnétique et peuvent ainsi être utilisées directement ou, dans une variante, traitées par des solutions d'enzymes généralement rencontrées dans les tests immuno-hématologiques. On décrit ci-dessous un mode de réalisation du procédé pour magnétiser des hématies sans endommager les antigènes qu'elles portent, dans lequel l'activation des particules est réalisée à l'aide d'une substance collante comprenant une solution d'albumine bovine.
Première étape : activation des particules ferromagnétiques
Des particules de type P201 de la société Ademtech sont mises en présence d'une solution d'albumine bovine à 0,1 % (poids/volume) en tampon PBS pH 7,2. Après une incubation de trente minutes à température ambiante et sous agitation (proscrire toute agitation magnétique), les particules en suspension sont attirées par un aimant et le surnageant dépourvu de particules est éliminé. Le culot de particules « encollées » peut être utilisé directement au cours de la phase de sensibilisation des hématies.
Suivant une autre réalisation, l'activation des particules peut être effectuée, éventuellement en plus de l'action d'une substance collante, à l'aide d'agent mouillant ou détergent tel que l'acide cholique ou le Tween 20® de sorte à modifier l'état de surface desdites particules.
Suivant une réalisation supplémentaire, cette activation peut être effectuée à l'aide d'un rayonnement électromagnétique, tel qu'un rayonnement gamma ou UV, qui sont connus comme modifiant les surfaces de type plastique.
Deuxième étape : sensibilisation des hématies
Est ajouté, au culot de particules ferromagnétiques encollées, la suspension globulaire mise en tampon LISS (Low lonic Strenght Solution) à la concentration adéquate (possibilité de travailler avec des suspensions cellulaires comprises entre 0,6 à 10% et préalablement lavées trois fois ou non avec de l'eau physiologique par exemple). Après avoir parfaitement homogénéisé la suspension (vérifier qu'il n'existe plus d'agrégats de particules), celle-ci est incubée trente minutes à température ambiante sous agitation douce mais homogène (l'ensemble du volume reactionnel doit être mis en mouvement). Les hématies sont ensuite lavées avec un tampon PBS pH 7,4 (deux lavages par centrifugation, trois minutes à 500g). Le culot d'hématies sensibilisées peut être ensuite repris à la concentration de mise en œuvre de l'analyse à l'aide d'un tampon de LISS
Dans un exemple particulier, le rapport entre la quantité de particules mises en œuvre et la quantité d'hématies est compris entre 600 et 1000 de sorte à obtenir une magnétisation suffisante sans risquer de dégrader les antigènes présents à la surface de l'hématie. La surface occupée par les particules représente typiquement de l'ordre de 10% de la surface totale de la membrane de l'hématie.
L'utilisation de cette méthode permet ainsi d'augmenter la susceptibilité magnétique des hématies sans altérer les antigènes qu'elles portent.
Ces hématies sensibilisées par les particules paramagnétiques présentent alors la double propriété d'être attirée par un champ magnétique et également de posséder à leur surface les antigènes sanguins (groupe et phénotype). Elles pourront alors être utilisées comme support de réaction et vecteur de transport du couple antigène-anticorps dans un test d'analyse immunologique.
Par exemple, les hématies ainsi obtenues peuvent être utilisées dans des tests de type RAI (Recherche d'Agglutinines Irrégulières) soit directement en tant que réactif ou en tant qu'analyte, soit subir un traitement par des enzymes protéolytiques telle que la papaïne pour effectuer une analyse dite enzymatique.
En effet, ces hématies présentant à leur surface des particules ferromagnétiques leur conférant une propriété paramagnétique, peuvent être entraînées sous l'action d'une force magnétique vers la zone réactive d'un dispositif de visualisation de sorte à permettre la détection d'anticorps dirigés contre des déterminants antigéniques présents à la surface des hématies. Il est également possible de traiter directement à l'aide du procédé décrit les globules rouges en tant qu'analyte d'un échantillon de sang pour les rendre paramagnétiques, et ainsi permettre la migration desdits globules rouges vers une zone apte à détecter les antigènes qu'ils supportent.
Dans d'autres modes de réalisation, des éléments particulaires, par exemple des anticorps, peuvent être traités de sorte à être rendus paramagnétiques au moyen d'une méthode analogue à celle présentée ci-dessus.
Dans le cas d'anticorps magnétisés, ils peuvent être utilisés pour l'entraînement desdites hématies par exemple pour leur groupage.
Suivant d'autres modes de réalisation, des marqueurs chimiques peuvent être traités de sorte à être rendus paramagnétiques au moyen d'une méthode analogue à celle présentée ci-dessus.
De tels marqueurs magnétisés présentent alors la double propriété d'être attirés sous l'effet d'un champ magnétique et de conserver une surface fonctionnelle pour permettre le couplage de toutes sortes de molécules chimiques ou biologiques.
Le procédé de l'invention permet une magnétisation directe de marqueurs, et notamment d'éléments figurés, sans l'utilisation de molécules couplées de manière covalente.
Par ailleurs, l'interaction entre les particules et les marqueurs est non définitive. Il existe donc une possibilité de retrouver après désorption des particules les marqueurs dans leur état initial. Cette étape de désorption peut se faire dans des conditions douces n'altérant pas la surface du marqueur. Le procédé présente également l'avantage de la rapidité et de la simplicité de la mise en place de l'interaction entre les marqueurs et les particules, simplement sous l'influence des probabilités de rencontre des éléments devant interagir.
En outre, les particules utilisées sont des produits non biologiques dont la durée de conservation est très longue et sans commune mesure avec celle de particules fonctionnalisées avec des produits biologiques qui sont reconnues pour être d'une grande instabilité dans le temps.
Enfin, il n'est pas nécessaire de développer un nouveau couple particule - marqueur pour chaque utilisation car un type de particules est utilisable vis-à- vis de différents marqueurs (globules rouges, plaquettes sanguines, autres cellules, parasites ...) possédant les mêmes caractéristiques de surface (zones hydrophobes et /ou hydrophiles).

Claims

REVENDICATIONS
1. Procédé de magnétisation de marqueurs chimiques ou biologiques à l'aide de particules magnétiques, ledit procédé comprenant les étapes consistant à :
- activer les particules magnétiques de sorte à modifier leur état de surface ;
- mettre en contact les particules magnétiques activées avec les marqueurs de sorte à créer des liaisons non spécifiques entre eux.
2. Procédé selon la revendication 1 , caractérisé en ce que l'activation des particules magnétiques est réalisée à l'aide d'une substance collante.
3. Procédé selon la revendication 2, caractérisé en ce que la substance collante comprend une solution d'albumine bovine.
4. Procédé selon la revendication 1 , caractérisé en ce que l'activation des particules magnétiques est réalisée à l'aide d'un agent mouillant ou détergent.
5. Procédé selon la revendication 1 , caractérisé en ce que l'activation des particules magnétiques est réalisée à l'aide d'un rayonnement électromagnétique.
6. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que les marqueurs sont des cellules, par exemple des hématies portant sur leur surface des antigènes de groupe sanguin.
7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que les marqueurs sont des anticorps.
8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que le rapport entre la quantité de particules mises en œuvre et la quantité de marqueurs est compris entre 600 et 1000.
9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que la taille des particules est inférieure au micron et par exemple d'environ 200 nm.
10. Utilisation de marqueurs biologiques magnétisés par la mise en œuvre d'un procédé selon l'une quelconque des revendications 6 à 9 comme réactifs ou analytes dans un test d'analyse biologique.
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